一、實(shí)驗(yàn)介紹

在真核生物中發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控功能的內(nèi)源性非編碼RNA，大小約20-25個(gè)核苷酸，我們根據(jù)成熟miRNA序列信息，合成含有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA連接至測(cè)翼序列的表達(dá)在體中，將其轉(zhuǎn)染/病毒包裝感染進(jìn)入細(xì)胞後，由II型啟動(dòng)子(CMV)啟動(dòng)表達(dá)，經(jīng)核酸酶的剪切加工，組裝RNA誘導(dǎo)的沉默複合體，通過(guò)鹼基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶mRNA，並根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默複合體降解靶mRNA或者阻擋mRNA的翻譯

二、實(shí)驗(yàn)週期

25-30工作日

三、交付標(biāo)準(zhǔn)

 慢病毒抑制載體構(gòu)建，慢病毒包裝與純化，滴度測(cè)定

四、客戶提供

miRNA序列信息

 五、實(shí)驗(yàn)流程

合成pre-miRNA序列       連接至miRNA表達(dá)載體         挑選陽(yáng)性克隆測(cè)序驗(yàn)證      

慢病毒包裝       構(gòu)建miRNA慢病毒表達(dá)載體       慢病毒包裝       滴度檢測(cè)    

腺病毒包裝       構(gòu)建miRNA腺病毒表達(dá)載體       腺病毒包裝       滴度檢測(cè)