一、實驗介紹
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(永久性轉(zhuǎn)染),前者外源DNARNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達到高水平表達,但通常只能維持幾天,在轉(zhuǎn)染後的24-72小時內(nèi)分析結(jié)果,後者外源質(zhì)粒DNA整合到宿主細胞染色體上,使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白,需要在瞬時轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對靶細胞性行篩選,篩選得到的細胞可穩(wěn)定表達目的蛋白,用於蛋白的擴增及富集,或得到穩(wěn)定沉默特定基因的細胞株
二、實驗週期
5-7 工作日(瞬時轉(zhuǎn)染) 50-60 工作日(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染)
三、交付標準
細胞、實驗結(jié)果報告(材料、方法、數(shù)據(jù)分析、實驗結(jié)果)
四、客戶提供
瞬時轉(zhuǎn)染客戶提供:待轉(zhuǎn)染細胞株及細胞培養(yǎng)相關(guān)信息、待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒、目的基因信息、目的蛋白抗體
常規(guī)細胞或特殊細胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(質(zhì)粒轉(zhuǎn)染)客戶提供:待轉(zhuǎn)染細胞株、待轉(zhuǎn)染質(zhì)粒(包括質(zhì)粒測序結(jié)果)、目的基因信息、目的蛋白抗體
五、實驗流程
順時轉(zhuǎn)染:調(diào)整細胞狀態(tài) 細胞轉(zhuǎn)染 24、48、72hr檢測目的基因的表達
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:調(diào)整細胞狀態(tài) 細胞轉(zhuǎn)染 抗生素篩選 混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株獲得 穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株鑑定
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