DAPI 100mg(4',6-二脒基-2-苯基吲哚二醋酸鹽)
產(chǎn)品名稱:DAPI 【Assay: ≥98% (HPLC and TLC)】
中文別名: 4',6-二脒基-2-苯基吲哚二醋酸鹽
產(chǎn)品CAS :28718-90-3
產(chǎn)品編碼:D001-100mg
DAPI,也稱DAPI dihydrochloride,是一種常用的核酸染料,可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結(jié)合,產(chǎn)生比自身強(qiáng)20多倍的藍(lán)色熒光。
和EB(ethidium bromide)相比,DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。DAPI也可對RNA進(jìn)行染色,染色機(jī)理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA
(Ex/Em=358nm/461 nm),
DAPI-RNA具有較長的最大發(fā)射波長(500 nm),其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。
盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜,但可以通過提高濃度使之進(jìn)入活細(xì)胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平,能用來檢測酵母線粒體DNA,葉綠體DNA,病毒DNA,Microplasm DNA以及
染色體DNA。
DAPI典型的藍(lán)色熒光特性使其非常普遍的搭配其他綠色、黃色或紅色熒光染料用于細(xì)胞生物學(xué)多色熒光標(biāo)記技術(shù),因此也常作為核酸和染色體的復(fù)染劑用于細(xì)胞凋亡檢測、RNA原位雜 交、直接或間接免疫檢測等領(lǐng)域,其染色后可用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。
使用方法:
1. 配制工作液:
用雙蒸水或PBS稀釋母液,配制成所需要的工作的濃度(0.5-10 μg/mL)。
2. 固定的細(xì)胞或組織染色:
對于固定的細(xì)胞或組織樣品,固定后,適當(dāng)洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進(jìn)行。如果不需要進(jìn)行其它染色,則直接進(jìn)行DAPI 染色。
a) 對于貼壁細(xì)胞或組織切片:加入適量DAPI染色液,覆蓋住樣品即可。
b) 對于懸浮細(xì)胞:至少加入待測染色樣品體積3倍的染色液,混勻。室溫放置3-5分鐘。
c) 吸除DAPI染色液,用TBST、PBS或生理鹽水洗滌2-3次,每次3-5分鐘。
d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm,發(fā)射波長460 nm。
3. 活細(xì)胞或組織染色:
a) 細(xì)胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液,約1/10細(xì)胞培養(yǎng)基體積,必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1 mL染色液,對于96孔板一個孔需加入100 μL染色液。
b) 在37℃培養(yǎng)細(xì)胞 10~20 分鐘。
c) 用 PBS或合適的緩沖液洗細(xì)胞兩次。
d) 直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm,發(fā)射波長460 nm。
DAPI,熒光顏色:藍(lán)色;染細(xì)胞類型:活細(xì)胞和固定細(xì)胞;應(yīng)用:
(1)DAPI是一種常用的可以穿透細(xì)胞膜藍(lán)色熒光DNA染料,可對DNA 染色的細(xì)胞核染色試劑,其與DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI 自身強(qiáng)20多倍的熒光,而與單鏈DNA結(jié)合無熒光的增強(qiáng)。
(2)DAPI常用于細(xì)胞凋亡檢測,染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細(xì)胞儀檢測。DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高于EB和PI,熒光強(qiáng)度比Hoechst低,但光穩(wěn)定性高于Hoechst。
(3)DAPI能快速進(jìn)入活細(xì)胞中與DNA結(jié)合,因此DAPI對生物體而言,也被視為-種毒性物質(zhì)與致癌物。使用過程中應(yīng)注意操作與拋棄的處理程序。
使用PI單一染色觀測培養(yǎng)細(xì)胞,只能表示細(xì)胞的壞死情況,而不是凋亡(當(dāng)然晚期凋亡PI亦可著色)。
但是如果我們只是想知道細(xì)胞的死亡情況,而不是仔細(xì)區(qū)分壞死或凋亡,那么PI單一染色即可以。但是如果我們一定要認(rèn)定細(xì)胞的凋亡,那么PI單一染色顯然不夠!
這個時候使用Abbkine的細(xì)胞狀態(tài)檢測系列產(chǎn)品,例如,TUNEL法細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(細(xì)胞凋亡晚期),Annexin V/PI細(xì)胞凋亡檢測試劑盒和線粒體膜電位分析試劑盒(JC-1)
(細(xì)胞凋亡早期)以及Caspase系列活性分析試劑盒(比色法)(細(xì)胞凋亡中期)。
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