IPTG 為安慰性誘導(dǎo)物,X-gal 為生色底物,二者共同用于藍(lán)白斑篩選。IPTG 可誘導(dǎo)載體Lac操縱子DNA 區(qū)段合成β-半乳糖苷酶氨基端片段,該片段可與宿主細(xì)胞編碼的缺陷型β-半乳糖苷酶實(shí)現(xiàn)基因內(nèi)互補(bǔ)(α 互補(bǔ))。實(shí)現(xiàn)α 互補(bǔ)的細(xì)菌鋪在含有X-gal 生色底物的培養(yǎng)基上,可形成藍(lán)色菌落。外源DNA 插入質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)后可破壞α 互補(bǔ)作用,將產(chǎn)生白色菌落。
儲液濃度:2%(w/v)的X-gal溶于二甲基甲酰胺中。避光儲存于-20℃。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn):
1.純度高Assay (HPLC): 99.4 %
2.靈敏度高,在藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)中,能夠使得菌落清晰地顯示藍(lán)斑或者白斑,顏色對比明顯,能夠清晰辨別出目的菌落。
3.穩(wěn)定性強(qiáng),即使經(jīng)過121℃滅菌20min處理,也不會影響其活性。
•藍(lán)白斑菌落篩選,以區(qū)分重組(白色)與非重組(藍(lán)色)菌落
•轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞中 β-半乳糖苷酶報(bào)告基因表達(dá)的可視化
•免疫學(xué)和組織化學(xué)程序中 β-半乳糖苷酶活性的檢測
注意:
•建議針對 X-Gal 制備 20 mg/mL 儲備液(溶于二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲亞砜 (DMSO))。
DMF 可溶解一些塑料材料。因此需避免直接將含有二甲基甲酰胺的溶液加入到塑料培養(yǎng)皿中。
•DMF 有毒。在瓊脂平板上涂布細(xì)菌前,使含有二甲基甲酰胺的 X-Gal 溶液完全干燥。