潮霉素B（Hygromycin B）是由吸水鏈霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，
通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成，
從而殺死原核（如細(xì)菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
大腸桿菌（ Escherichia coli.）來(lái)源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶，
將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物，從而起到解毒作用。
針對(duì)這一原理，潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記，用來(lái)篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。
另外，由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和Blasticidin S聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細(xì)胞株的選擇。
潮霉素B還能用作抗病毒劑，因其選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，且具有抑制翻譯的功效。
還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
本品是無(wú)菌的潮霉素B溶液（100mg/mL in PBS buffer），可直接用培養(yǎng)液稀釋使用。
1. 常用篩選濃度
潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，
推薦使用濃度為50-1000 μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve）
即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定*篩選濃度。
一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200 μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
【注意事項(xiàng)】：
為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素*濃度，
可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。
1）第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜。
【注】：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2）根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。
以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000 μg/mL。
先用去離子水或者PBS buffer按照比例將母液稀釋，然后稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3）第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4）接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5）按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。
選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的*濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1）轉(zhuǎn)染48 h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
【注】：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果*。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。
為了得到較好的篩選效果，*將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。
2）每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3）篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞*（集落）的形成情況。
集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4）挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性*于35 mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5）之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
抗生素一般是指抵抗微生物的藥物，以其功效作用分類，有抑制細(xì)菌生長(zhǎng)及剎滅細(xì)菌的抗生素，但一般以其化學(xué)結(jié)構(gòu)分類
大致上分類如下：
青霉素類
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Amoxicillin（阿莫西林）
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Ampicillin sodium（安比西林鈉）
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Apalcillin（阿帕西林）
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Azlocillin（阿洛西林）
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Benzathine Benzylpenicillin（長(zhǎng)效青霉素，比西林）
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Benzylpanicillin potassium（青霉素，青霉素鉀）
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Carbeicillin sodium（卡比西林）
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Cloxacillin sodium（氯唑西林鈉）
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Dicloxacillin sodium（雙氯西林鈉）
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Furbenicillin
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Mecillinam， Amidinocillin（美西林）
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Methicilline sodium（甲氧西林，甲氧苯青霉素）
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Mezlocillin（美洛西林）
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Oxacillin sodium（苯唑西林鈉，新青霉素II）
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Penicillin G sodium， Benzylpanicillin sodium（青霉素，盤尼西林）
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Penicillin V（青霉素V）
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Piperacillin sodium
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Procaine benzylpenicillin（普魯卡因青霉素）
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Sulbenicillin sodium, Kedacillin
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Temocillin（替莫西林）
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Ticarcillin disodium（替卡西林鈉）
頭孢菌素類
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Aztreonam（氨曲南）
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Cefacetrile sodium（頭孢賽曲）
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Cefaclor（頭孢克羅）
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Cefadine（頭孢拉定）
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Cefadroxil（頭孢羥氨芐）
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Cefalexin（苯甘頭孢菌素）
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Cefamandole（頭孢孟多）
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Cefapirin（頭孢匹林）
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Cefatrizine（頭孢曲秦）
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Cefathiamidine（頭孢硫月米）
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Cefazolin sodium（頭孢唑林鈉）
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Cefdinir（頭孢地尼）
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Cefmenoxime
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Cefmetazole（頭孢美唑）
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Cefminox（頭孢米諾）
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Cefodizime（頭孢地秦）
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Cefoperazone
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Cefotaxime
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Cefotetan（頭孢替坦）
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Cefotiam（頭孢替安）
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Cefoxitin（頭孢西?。?/span>
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Cefpirome（頭孢匹羅）
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Cefpodoxime proxetil
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Cefsulodin
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Ceftazidime（頭孢塔齊定）
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Cefteram（頭孢特侖）
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Ceftibuten（頭孢布烯）
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Ceftizoxime
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Ceftriaxone（頭孢曲松）
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Cefuroxime
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Cefuroximeaxetil
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Cefuzonam（頭孢唑南）
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Cephaloridine（頭孢利素I）
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Cephalothin sodium（頭孢菌素I）
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Clavulanic acid（克拉維酸）
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Flomoxef（氟氧頭孢）
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Imipenem（亞胺培南）
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Latamoxef sodium（拉氧頭孢）
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Sulbactam（舒巴坦）
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Thienamycin（硫霉素）
磷霉素類
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Fosfomycin，F(xiàn)osmicin（磷霉素，福賜美仙）
萬(wàn)古霉素類
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Norvancomycin（去甲萬(wàn)古霉素）
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Vancomycin hydrochloride（鹽酸萬(wàn)古霉素）
利福霉素類
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Rifampin（利福平）
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Rifamycin SV（利福霉素SV）
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Rifandin（利福定）
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Rifapentine（利福噴?。?/span>
多粘菌素類
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Polymyxin B（多粘菌素B）
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Polymyxin E sulfate（硫酸多粘菌素E）
氨基糖類
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Amikacin sulfate（硫酸阿米卡星）
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Astramicin A， Astromycine， Fortimicin A（阿司米星）
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Dibekacin（地貝卡星）
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Gentamycin sulfate（硫酸慶大霉素）
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Isepamicin（異帕米星）
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Kanamycin sulfate（硫酸卡那霉素）
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Micronomicin（小諾米星）
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Neomycin sulfate（硫酸新霉素）
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Ribostamycin（核糖霉素）
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Sisomicin（西索米星）
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Spectinomycin hydrochloride， Trobicin（鹽酸大觀霉素）
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Streptomycin sulfate（硫酸鏈霉素）
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Tobramycin（妥布霉素）
四環(huán)素類
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Chlortetracyclin hydrochloride（鹽酸金霉素）
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Doxycycline hydrochloride（鹽酸多西環(huán)素）
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Metacycline hydrochloride（鹽酸美他環(huán)素）
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Minocycline（米諾環(huán)素）
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Oxytetracycline hydrochloride（鹽酸土霉素）
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Tetracycline hydrochloride（鹽酸四環(huán)素）
大環(huán)內(nèi)酯類
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Azithromycin（阿奇霉素）
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Clarithromycin（克拉霉素）
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Dirithromycin（地紅霉素）
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Erythromycin（紅霉素）
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Erythromycin estolate（依托紅霉素）
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Josamycin（交沙霉素）
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Kitasamycin， Leucomycin（吉他霉素）
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Meleumycin（麥白霉素）
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Medecamycin（麥迪霉素）
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Medecamycin acetate（醋酸麥迪霉素）
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Rokitamycin（羅他霉素）
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Roxithromycin（羅紅霉素）
氯胺苯醇類
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Chloramphenicol（氯霉素）
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Chloramphenicol palmitate（氯霉素棕櫚酸酯）
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Thiamphenicol（硫霉素）
林可霉素類
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Clindamycin hydrochloride（鹽酸克林霉素）
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Lincomycin hydrochloride（鹽酸林可霉素）
作用機(jī)制：
潮霉素B是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成而殺死細(xì)菌、真菌和高等真核細(xì)胞。
潮霉素B通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成。目前常用于篩選和維持培養(yǎng)含潮霉素抗性基因的原核或真核細(xì)胞。
抗性基因：
對(duì)潮霉素B的抗性源自編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶（Hph）的基因。至今發(fā)現(xiàn)兩種來(lái)源：
? Streptomyces hygroscopicus產(chǎn)生的Hph抗性基因；
? Escherichia coli，Klebsiella pneumoniae內(nèi)質(zhì)粒攜帶的Hph抗性基因（常用）
生物應(yīng)用：
1）篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph+載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞（植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞）；
2）由于作用模式的差異，常與G418 (GeneticinTM)，Zeocin™ 和blasticidin S聯(lián)合使用，篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個(gè)不同載體的細(xì)胞株；
3）抗病毒劑，由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入因病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞，而且具有抑制翻譯的功效；
4）作為驅(qū)蟲藥加入動(dòng)物飼料；
應(yīng)用濃度：
潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化。推薦使用濃度為50-1000 μg/mL，最佳濃度需要?dú)缜€來(lái)確定。
哺乳動(dòng)物細(xì)胞·200-500 μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞·100-300 μg/mL；真菌·300-1000 μg/mL；
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