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①選取的RNA序列不對;
②樣品中沒有表達(dá)互作的蛋白質(zhì)。
③互作蛋白濃度低,銀染圖肉眼觀察不到差異條帶。
④其他
更多建議:
①lncRNA序列前期驗(yàn)證要完善;
②選擇相應(yīng)蛋白質(zhì)表達(dá)量較高的組織或細(xì)胞樣品;
③體外轉(zhuǎn)錄選擇轉(zhuǎn)錄質(zhì)量高的試劑盒,操作過程避免Rnase的污染;
④保證RNA Pull-down實(shí)驗(yàn)中探針標(biāo)記以及探針與蛋白的結(jié)合充分進(jìn)行(依據(jù)體外轉(zhuǎn)錄RNA的量,樣品裂解液蛋白濃度);
⑤盡可能多將洗脫的蛋白電泳(同時(shí)可以避免顯色時(shí)間過長)
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