考馬斯亮藍(lán)（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結(jié)構(gòu)上前者比后者多了2個(gè)甲基，命名上“G”為Green 的縮寫，因G250的藍(lán)色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫，因R250的藍(lán)色染料呈微紅色調(diào)；“250”表示考馬斯亮藍(lán)的純度。生化實(shí)驗(yàn)中常將考馬斯亮藍(lán)用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過(guò)與蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基和羧基基團(tuán)間的靜電結(jié)合作用以及范德華力，考馬斯亮藍(lán)與蛋白質(zhì)形成強(qiáng)但非共價(jià)鍵連接的復(fù)合物。蛋白-染料復(fù)合物的形成穩(wěn)定染料攜帶的負(fù)電荷陰離子（如磺酸基），從而產(chǎn)生在膜上或者膠上肉眼可見(jiàn)的藍(lán)色。

考馬斯亮藍(lán)R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達(dá)0.1 µg蛋白。但是染色背景比較深，需要褪色后才能進(jìn)行蛋白條帶的觀察?？捡R斯亮藍(lán)G250對(duì)蛋白膠染色的靈敏度相對(duì)較差，最低檢測(cè)到0.5 µg蛋白。但是因其在三氯乙酸中不溶而以膠體形式存在，選擇性的和蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物，染色迅速，著色深的蛋白質(zhì)條帶數(shù)秒內(nèi)可以顯現(xiàn)出來(lái)，約45 min后著色最深。而且染色背景低，不需要脫色即可進(jìn)行蛋白條帶的觀察。因此，非常適合對(duì)電泳凝膠蛋白的快速定性分析。

考馬斯亮藍(lán)G250較多的用于溶液體系中蛋白的定量分析，即Bradford蛋白結(jié)合檢測(cè)法（Bradford protein-binding assay），此方法利用的就是G250與蛋白質(zhì)結(jié)合的特性，Bradford試劑（也就是酸化的G250溶液）為陽(yáng)離子，主要為雙質(zhì)子化，溶液為紅色，其最大吸收波長(zhǎng)（Amax）為470 nm。當(dāng)與蛋白穩(wěn)定結(jié)合后，G250以陽(yáng)離子，非質(zhì)子化的形式存在，溶液變?yōu)樗{(lán)色，最大吸收波長(zhǎng)遷移到595 nm。藍(lán)色陽(yáng)離子形式染料的量與樣本中蛋白的量成正比，因此通過(guò)直接測(cè)定595 nm的吸光度來(lái)反映蛋白量。此法的優(yōu)點(diǎn)在于G250與蛋白質(zhì)結(jié)合所需的時(shí)間較短（約2 min左右），且結(jié)合的G250-蛋白質(zhì)復(fù)合物室溫下約1 h內(nèi)保持穩(wěn)定。反應(yīng)靈敏度高，是一種非常常用的微量蛋白快速定量方法。

考馬斯亮藍(lán)R250（Coomassie brilliant blue R250）。λmax=560―590nm。染色靈敏度比氨基黑高5倍。尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色。它與不同蛋白質(zhì)結(jié)合呈現(xiàn)出基本相同的顏色，并且在比較寬的范圍內(nèi)，掃描峰的面積與蛋白量呈線性關(guān)系。但蛋白質(zhì)濃度超出一定范圍時(shí)，對(duì)高濃度蛋白的染色不符合Beer定律，用作定量分析時(shí)要注意這點(diǎn)。

考馬斯亮藍(lán)R250 和G250在用途上有什么區(qū)別?

R250中的R代表Red,偏紅,R250屬于慢染,脫色脫的完全,主要用于電泳染色
λmax=560―590nm.染色靈敏度比氨基黑高5倍.尤其適用于SDS電泳微量蛋白質(zhì)染色.但蛋白質(zhì)濃度超出一定范圍時(shí),對(duì)高濃度蛋白的染色不符合Beer定律,用作定量分析時(shí)要注意.
G250中的G就是Green,偏綠,G250屬于快染,脫色脫的不徹底,主要用于蛋白測(cè)定
比考馬斯亮藍(lán)R250多二個(gè)甲基.;λmax=590―610nm.染色靈敏度不如R250,但比氨基黑高3倍.優(yōu)點(diǎn)在于它在三氯乙酸中不溶而成膠體,能選擇地染色蛋白而幾乎無(wú)本底色.所以常用于需要重復(fù)性好和穩(wěn)定的染色,適于作定量分析.